[VIP第1年] 指数:3
蜂毒肽的分子生物学机制
至今为止，对于蜂***的***及溶血机理仍然很不确定，以往研究认为，抗细菌素类是通过穿孔模型形成膜空洞机制引起***的。但深入研究发现，有些抗细菌素与细胞膜的作用方式与穿孔模型有明显
不同，后来便提出了一种新的作用模式--地毯模式。目前，抗细菌素侵膜机理占主导地位的观点仍然是穿孔模型和地毯模式机理。根据蜂***的这种侵膜机制，赵亚华等通过实验有目的地改造了蜂***的氨基酸的一级结构序列以及所要表达的蜂***基因。尽量使蜂***在与细菌细脑膜相互作用时，主要采取地毯模式侵膜而引起***，山西蜂毒，同时，山西蜂毒，由于带电荷数与分子构象的改变，山西蜂毒，**降低了它与血细胞膜两亲性作用的几率，从而达到***溶血性的目的。改造后的蜂***的溶血性与标准样品的溶血活性相比，有较大幅度降低，大约降低了14.3 倍。 用于工业生产的蜂毒主要有两种。山西蜂毒
2001年，黄雪强等通过人白血病细胞观察蜂毒肽促凋亡的作用，结果发现对白血病细胞5mg/mL蜂毒肽作用4h与4μg/mL蜂毒肽作用24h都可见典型凋亡特征，进一步实验发现其诱导细胞凋亡同bcl-2基因表达***下降相关。
王秋波等通过人工合成含特异性酶切位点的AB两条寡核苦酸片段，在Klenow酶作用下形成目的基因，用限制型内切酶HindⅢ，XmnⅠ同时酶切目的基因和表达载体Pmal-p2质粒，在T4连接酶的作用下构建两者的重组体，通过α-互补筛选出附性克隆，并通过特异性酶切和测序分析进行鉴定，获得重组蜂毒肽的原核表达克隆。 山西蜂毒蜂毒 肽由26个氨基酸组成，是不对称的线性多肽。
1972年，Habermant报道1μmol/L的蜂毒肽就能阻止**细胞增殖但却不***正常细胞的生长与克隆率。
1983年，Vlasak等用mRNA-DNA逆转录的方法，利用质粒pBR322构建了蜂王毒腺的cDNA文库，用蜂王毒腺总mRNA制作探针从此文库中分离得到了蜂毒肽的cDNA，再进一步将其克隆到质粒pUC18上进行DNA序列分析，由DNA的序列分析结果推测出的蜂毒肽序列与实际测得的完全相同。
1996年，Arora通过对正常大鼠肝细胞与大鼠肝*细胞抗缺氧损伤能力的实验对比，证实蜂毒肽***磷脂酶A2(PLA2)能够解除肝*细胞对缺氧的抵抗。DUnn等将来自于鼠抗人骨髓瘤细胞和淋巴瘤细胞表面特异蛋白的抗体SCFV基因同蜂毒肽基因相融合，构建了能杀**细胞的抗***基因，大肠杆菌中融合基因并表达，精制的抗***显示了体外杀死**细胞的效能。 Kindas等从处女蜂王的毒腺中提取得到了总mRNA，发现蜂毒肽mRNA含大约400个碱基对和1个短的polyA尾。 Haase实验表明蜂毒肽可以***细胞脂酶，包括磷脂酶C(PLC)、磷脂酶D(PLD)、磷脂酶A2(PLA2)及甘油三酯酶等。
蜂毒肽制备方法
目前获取蜂毒肽的方法有3种，化学合成、从粗蜂毒中分离纯化和生物工程法。利用化学合成的方法可以获得具有生物活性的蜂毒肽纯品，但其成本太高，并不适合蜂毒肽的生产，实际应用较少。目前，获取蜂毒肽纯品的主要途径是从粗蜂毒中分离纯化。分离纯化方法以色谱理论为基础，随着色谱技术的发展以及与其他提取工艺的结合，操作成本逐渐降低，产量和纯度有所提高。利用生物工程技术可以诱导蜂毒肽基因在工程菌中表达，然后收集纯化表达蛋白，从而得到蜂毒肽纯品。由于蜂毒肽有破坏细胞膜以及致死细胞毒性，其在工程菌中的直接表达无法实现。面对这个问题，科学家们找到了在工程菌中表达蜂毒肽融合蛋白的方法，并在融合蛋白的选择及后期分离纯化上进行了大量研究，取得较大进展。 蜂毒的价格极为昂贵(在所有蜂产品中都是**贵的)。
一、取毒对象
蜂毒是工蜂尾部毒囊排出的透明毒液(蜂王和雄蜂没0腺而不能生产蜂毒)，工蜂在刚出房时毒囊中只有极少量的蜂毒，之后随着日龄增长毒囊中的毒液也会逐渐增多，但18日龄后毒囊中的毒液便会停止增长，此时1只工蜂大约可以生产0.3毫克蜂毒，因此蜂毒的采集对象主要是18日龄后的成年工蜂。
蜜蜂
二、操作原理
蜂毒**常用的采集方法是电刺激法，原理是工蜂受到弱电流刺激时会产生蛰刺和排毒的反射行为，此时若能将工蜂排出的毒液收集起来便可得到较为纯净的蜂毒，而且电刺激法取毒相对于其他取毒方法而言对工蜂的伤害非常小，采用这种方法取毒后工蜂并不会死亡，只是工蜂的毒囊中没0液而已。 蜂毒是蜜蜂蛰刺时排出的毒液，因价格昂贵且产量稀缺而被誉为“液体黄金”。山西蜂毒
蜂毒中的磷脂酶A皇约占全毒于重的8％～l2％。山西蜂毒
3、蜂毒电离子导入法
蜂哲疗法和蜂针法虽然效果都很***，但病人由于怕痛，加上活蜜蜂不易保存，故而有人发明了蜂毒电离子导入法。具体方法是：先将蜂毒冻干粉与生理盐水配成一定比例的溶液，然后将该溶液均匀地浸湿衬垫，并接通两极的电源，利用直流电通过无损伤皮肤将蜂毒离子导入体内。***后，皮肤略有充血、微肿和轻度的痒感。
4、蜂毒注射法
将蜂毒制成各种制剂，然后皮下注射，***疾病。此法简单易行，不受地区、季节、活蜂的限制。但由于生产蜂毒制剂时，挥发性物质易丢失，因此效果不如以上方法。
山西蜂毒
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